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了解這些ELISA實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié),何愁實(shí)驗(yàn)不成功
更新時(shí)間:2018-09-25   點(diǎn)擊次數(shù):1036次

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◆注意事項(xiàng):
1、標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測(cè)。如有細(xì)菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會(huì)發(fā)作假陽(yáng)性反響。保存過(guò)久可發(fā)作聚合在ELISA中可使本底加深。
2、凍結(jié)標(biāo)本溶解后,蛋白質(zhì)部分濃縮,分布不均,應(yīng)充沛混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下顛混合,不要在混勻器上激烈震動(dòng)。
3、污濁或有沉積的標(biāo)本應(yīng)先離心或過(guò)濾,弄清后再檢測(cè)。
4、重復(fù)凍融會(huì)使蛋白效價(jià)降低,所以代測(cè)樣本如需保存作屢次檢測(cè),宜少數(shù)分裝冰存。

◆ELISA需要遵從的幾個(gè)細(xì)節(jié)關(guān)鍵:
1.抗原或抗體能吸附于固相載體外表,并堅(jiān)持其免疫學(xué)活性;
2.抗原或抗體可通過(guò)共價(jià)鍵與酶銜接構(gòu)成酶結(jié)合物,而此種酶結(jié)合物仍能堅(jiān)持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性;
3.酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后,可根據(jù)參加底物的色彩反響來(lái)斷定是否有免疫反響的存在,并且色彩反響的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的,可根據(jù)已知濃度的抗原或抗體的色彩反響的深淺繪制規(guī)范曲線并依此計(jì)算出不知道樣品中抗體或抗原的濃度。
除了以上內(nèi)容,在ELISA試劑盒細(xì)節(jié)中,稀釋前、后的樣品有必要充沛混勻,一切試劑在加樣前也須搖勻,以確保試驗(yàn)的均一性。

 

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