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原位免疫PCR的原理
更新時間:2019-07-26   點擊次數:1320次

原位免疫PCR的原理

 
(一)基本原理

    Sano等(1992)利用基因工程的方法表達了A蛋白與鏈霉親和素的嵌合體分子獲得成功,建立了免疫PCR技術。這是一種新的抗原檢測系統,利用細胞工程和基因工程技術,巧妙地將抗原抗體反應的特異性同PCR的敏感性相結合,通過構建單克隆抗體與重組核酸的嵌合體分子,使得利用PCR技術檢測蛋白成為可能。隨后在免疫PCR的基礎上,建立了在細胞或組織原位檢測抗原的原位免疫PCR(in situ immuno-PCR)。


    原位免疫PCR是一種檢測系統,需要一種中介分子同時具有與DNA和抗體分子特異性結合的能力,其一端連接DNA,另一端連接抗原-抗體復合物,形成一個抗原-抗體-DNA連接物。作為標記的DNA分子用PCR擴增,檢測特異的PCR產物,即可間接證明抗原的存在。該技術與原位PCR不同,就是在PCR與原位雜交之間加了抗體的因素。原位PCR是先對切片或涂片進行PCR,以對組織細胞內的DNA或RNA進行擴增,使其拷貝數大大增加,然后再進行原位分子雜交。而該技術是先用特異性抗體(單抗)與相應或目的抗原反應。這個抗體在對抗原反應之前加上了人體不存在的或無關的DNA序列??贵w與抗原特異性反應后,用PCR擴增加在抗體上的DNA序列,然后再用該DNA序列的探針進行雜交檢測,也就是說用PCR及雜交的方法來放大免疫組織化學的反應,檢測目標是蛋白質。

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