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晶抗生物:抗體的生產(chǎn)制備進(jìn)程剖析抗體特異性差
更新時(shí)間:2019-08-23   點(diǎn)擊次數(shù):1095次

   抗體是生物學(xué)科研工作中有力的東西,沒(méi)有之一。這些“制導(dǎo)武器”,會(huì)在研究中自動(dòng)尋覓并結(jié)合研究者感興趣的目標(biāo),并可經(jīng)過(guò)各種示蹤技能將目標(biāo)展現(xiàn)出來(lái)。正是因?yàn)榭贵w的專(zhuān)一特性,研究者或許會(huì)依賴(lài)于示蹤試驗(yàn)所顯示的成果對(duì)所研靶標(biāo)給出定性或定量的判斷。也正因此,毫無(wú)疑問(wèn)的,專(zhuān)一性或特異性是抗體zui受科研工作者重視的特性。那么,抗體特異性首要由什么決定?為什么常聽(tīng)到多抗特異性不如單抗的說(shuō)法?在試驗(yàn)中,是該挑選單抗仍是多抗?

 
   下面咱們將就抗體的生產(chǎn)制備進(jìn)程剖析抗體特異性差異的原因。
 

   咱們不“生產(chǎn)”抗體,咱們只是大自然的“挑選”工抗體的制備,無(wú)論是單抗仍是多抗,其前期的動(dòng)物免疫進(jìn)程是*相同的,差異僅僅在挑選?;蛘哒f(shuō),單抗是在多抗制備的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步挑選并安穩(wěn)表達(dá)特異單克隆細(xì)胞株的成果。當(dāng)抗原免疫動(dòng)物后,在淋巴結(jié)和脾等淋巴器官內(nèi)經(jīng)過(guò)一系列抗原處理和遞呈,促進(jìn)B淋巴漿母細(xì)胞(Plasmablasts, PBs)分解老練,在轉(zhuǎn)錄水平成為排泄特異抗體的B淋巴漿細(xì)胞(Plasma cells, PCs),很多不同的漿細(xì)胞會(huì)排泄不同的針對(duì)抗原的抗體。由此,可以說(shuō)每一個(gè)B漿細(xì)胞都成為一株單克隆抗體的候選者。

 

   傳統(tǒng)的單克隆抗體制備便是經(jīng)過(guò)將小鼠脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞系交融,挑選可以排泄特異抗體并安穩(wěn)傳代的交融細(xì)胞株而實(shí)現(xiàn)的。而多克隆抗體(多抗)的制備便是從血清中分離純化一切的未經(jīng)挑選的單克隆抗體。從以上進(jìn)程可以看出,無(wú)論是單抗仍是多抗制備辦法,其針對(duì)靶點(diǎn)(抗原)的特異性抗體的發(fā)作首要源于被免疫動(dòng)物本身的漿細(xì)胞分解老練,抗體生產(chǎn)者(人)其實(shí)并沒(méi)有做什么。
 

   不同在于,多克隆抗體猶如許多單克隆抗體的調(diào)集,它們有的特異性高,有的特異性低,總體特異性符合正態(tài)分布曲線(xiàn)的方式(如Fig1),而其特異性的總體表現(xiàn)也應(yīng)處于統(tǒng)計(jì)學(xué)正態(tài)曲線(xiàn)中位線(xiàn)(MID)的水平。而單抗制備后續(xù)的挑選進(jìn)程,可去除大部分的非特異抗體,保存幾株特異性較好的單克隆抗體。
 

   然而,單抗制備進(jìn)程中的細(xì)胞交融是一個(gè)隨機(jī)發(fā)作的進(jìn)程,動(dòng)物脾臟內(nèi)的各種細(xì)胞如內(nèi)皮、平滑肌、巨噬、NK、T、還有紅細(xì)胞、血小板等都或許與骨髓瘤細(xì)胞系發(fā)作交融。盡管B細(xì)胞是脾臟內(nèi)首要的淋巴細(xì)胞,但可以排泄特異性抗體的老練漿細(xì)胞占脾細(xì)胞的比例很低,加之促細(xì)胞交融試劑如PEG等的細(xì)胞毒性,使得終成功交融形成安穩(wěn)表達(dá)特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞系的功率極低,大約為10-6。因此,在單抗制備進(jìn)程中,大部分排泄特異性抗體的B細(xì)胞或許都被丟失了。終獲得的單克隆抗體其親和力和特異性或許都不是本次免疫中的。

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