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今日課堂:關(guān)于抗體檢測常用的幾種方法
更新時(shí)間:2020-06-30   點(diǎn)擊次數(shù):1619次

一、直接法

    
將抗原直接固定在固相載體上,參與酶符號的一級抗體,即可測定抗原總量,此一級抗體的特異性非常重要。
    
1. 優(yōu)勢:操作手續(xù)簡略,因無須運(yùn)用二抗可防止交互反應(yīng)。
    
2. 缺點(diǎn):試驗(yàn)中的一抗都得用酶符號,但不是每種抗體都適合做符號,費(fèi)用相對進(jìn)步。
    

二、間接法
    
此測定方法與直接法類似,不相同在于一級抗體沒有酶符號,改用酶符號的二級抗體去辨識一級抗體來測定抗原量。
    
1. 優(yōu)勢:二抗可以加強(qiáng)信號,而且有多種挑選能做不相同的測定剖析。不加酶符號的一級抗體則能保存它多的免疫反應(yīng)性。
    
2. 缺點(diǎn):交互反應(yīng)發(fā)作的機(jī)率較高。
    

三、雙抗體夾心法
    
被檢測的抗原包被在兩個(gè)抗體之間,其間一個(gè)抗體將抗原固定于固相載體上,即捕捉抗體。另一個(gè)則是檢測抗體,此抗體可用酶符號后直接測定抗原的量;或不符號,再透過酶符的二級抗體來測定抗原的量。
    
1. 優(yōu)勢:高活絡(luò)、高專一性,抗原無須事前純化。
    
2. 缺點(diǎn):抗原必定得具有兩個(gè)以上的抗體部位。
    

四、根據(jù)細(xì)胞法(xin   ELISA技能)
    
是一種新的定性蛋白檢測技能,將細(xì)胞直接在微孔板里培養(yǎng),待檢測時(shí),不需抽提蛋白和裂解細(xì)胞,便可直接丈量微孔板里蛋白經(jīng)影響或抑制作用后的改變。
    
1. 優(yōu)勢:無需裂解細(xì)胞,所以方針蛋白丟掉zui少,可測定完好細(xì)胞、黏附細(xì)胞、還有非粘附細(xì)胞。
    
2. 缺點(diǎn):不能測定抗原量。
    

五、競賽法
    
樣本里的抗原(自在抗原)和純化并固定在固相載體上的抗原(固定抗原)一同競賽相同的抗體,當(dāng)樣品里的自在抗原越多,就可以越多的抗體,而固定抗原就只能到較少的抗體,反之亦然。經(jīng)清潔進(jìn)程,洗去自在抗原和抗體的復(fù)合物,只留下固定抗原和抗體的復(fù)合物,拿來與只需固定抗原的對照組成果相比較,依據(jù)呈色區(qū)別就可計(jì)算出樣品里的抗原含量。
    
1. 優(yōu)勢:可適用比較不純的樣本,而且數(shù)據(jù)再現(xiàn)性很高。
    
2. 缺點(diǎn):整體的敏感性和專一性都較差。

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