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上海晶抗生物就流式細胞術常見樣本的制備與保存詳細分解
更新時間:2023-06-08   點擊次數(shù):892次

流式細胞術是當代細胞分析技術之一,包括細胞計數(shù)、細胞內/外抗原分子檢測、細胞中DNA和RNA的倍體分析、細胞的生物學特性及功能分析等。

對于流式細胞分析而言,樣本制備的好壞對終的檢測結果有很大的影響。在免疫學和血液學中,應用流式細胞術分析的樣本多為外周血、骨髓、各類體液(如腦脊液、胸水、腹水)以及人體的組織(如淋巴結、脾、肝等),這幾種樣本要如何制備和保存呢? 



外周血骨髓保存方法

收集樣本后置于加有抗凝劑(一般選擇肝素或EDTA)的試管中,室溫保存,盡量在12 h內處理樣本;若無法及時處理,4℃保存,此時好選擇肝素抗凝管。


外周血骨髓處理步驟

一般不需要特殊處理制備單細胞懸液,所用試劑為淋巴細胞分離液和紅細胞裂解液。但在臨床檢測中,為了避免細胞成分丟失,通常不推薦使用淋巴細胞分離液分離單核細胞。


外周血骨髓怎樣選擇抗凝劑

血液標本可以使用EDTA、ACD(枸櫞酸葡萄糖)或肝素抗凝。一般認為,ACD和肝素抗凝的樣本72 h內細胞是穩(wěn)定的;EDTA抗凝48 h內是穩(wěn)定的。EDTA適用于白細胞的免疫表型分析,可防止成熟的髓系細胞貼壁造成細胞損失,并具有較強的抗血小板凝集能力,但對細胞活性的保持不如肝素抗凝。同時EDTA是二價陽離子的強螯合劑,會影響Ca2+相關的抗原位點(如CD11b等),并會抑制與Ca2+ 相關的細胞功能。肝素常用于白細胞功能研究,可維持Ca2+Mg2+在細胞內的生理濃度,更好保持細胞活性,適用于放置時間較長、不能及時檢測的樣本,但不適合血小板的相關檢測,骨髓樣本優(yōu)先選擇肝素抗凝。


體液保存方法

收集樣本后置于肝素抗凝管中,室溫保存,且盡量在12 h內處理樣本。若無法及時處理,則4℃保存,時間好不超過48 h。


體液處理方法

樣本1000-1500 rpm離心5 min,棄去上清;加入含有0.1%牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液(PBS),離心洗滌5 min;

加入適量PBS重懸。如有細小沉淀,用300目尼龍網過濾后備用。


組織保存方法

切取新鮮組織樣本置于生理鹽水或PBS中,室溫保存,盡量在12 h內處理樣本;若無法及時處理,4℃保存,保存時間好不要超過48 h。不建議用甲醛、乙醇固定細胞,不要用酶、表面活性劑處理細胞。


組織處理方法

流式細胞術常用的組織樣本制備單細胞懸液方法有:機械法、酶處理法、化學試劑處理法及表面活性劑處理法,在流式分析中,為保持抗原活性,多采用機械法處理樣本。采用機械法需注意動作輕柔,盡量減少細胞的損傷。

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