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人肝動脈平滑肌細胞培養(yǎng)方法

更新時間:2021-11-15

簡要描述:

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<strong><strong>人肝動脈平滑肌細胞培養(yǎng)方法</strong></strong>


培養(yǎng)工作中,主要從以下幾個方面來預防細胞支原體的污染:

A. 控制環(huán)境污染

B. 嚴格實驗操作

C. 細胞培養(yǎng)基和器材要保證無菌

D. 在細胞培養(yǎng)基中加入適量的抗生素

E. 避免細胞污染,可以從預防著手,超凈工作臺物品放置要合理、進入細胞房要換鞋和穿實驗服、實驗員戴手套后要用酒精等消毒、避免細胞交叉污染等等


培養(yǎng)準備和安裝過濾器:

清洗好過濾器,干燥,放入一張孔徑0.22μm的微孔濾膜,用布包裝好,15磅20 min進行高壓滅菌處理。 在超凈臺內(nèi)打開過濾器架好,膠管一端接入濾泵再插入待除菌的液體中,出口端膠管深入到已消毒好的瓶子中。用泵過濾,過濾后要檢查濾膜是否完好無損。


保存應用及安全性:

保存應用:新鮮細胞,請于收到后放入二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)靜置2-3小時后再進行實驗操作;如是凍存細胞,收到后可放入液氮或-80℃冰箱保存也可進行復蘇操作。


安全性:所有腫瘤和病毒轉(zhuǎn)染的細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需高壓滅菌后方能丟棄。收到細胞后,在倒置鏡下(是在4X物鏡)觀察整個細胞生長情況。

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細胞復蘇步驟:

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。


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訂購須知:

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E. 產(chǎn)品儲存:收到產(chǎn)品后需放置在陰涼處或冷藏,切記放置在高溫處


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