人熱休克蛋白60Hsp-60ELISA試劑盒經過數年的努力已迅速成為集科研和生產為一體的專業(yè)化生物工程公司，公司將進一步加強人才經營、產品經營，不斷提升企業(yè)的核心竟爭力，實現具有高科技產業(yè)體系、知識化創(chuàng)業(yè)團隊的國際化的公司，服務于生命科學領域，迎接世界經濟一體化所帶來的機遇與挑戰(zhàn)。

ELISA試劑盒的操作詳情：

1. 使用前，將所有試劑充分混勻，不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差。

2. 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數，每個標準品和空白孔建議做復孔，每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。

3. 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內，立即加入50ul的生物素標記的抗體，蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鐘。

4. 甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干，重復此操作4次，如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。

5. 每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

6. 甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干，重復此操作4次，如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。

7. 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育5分鐘，避免光照。

8. 取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。

9. 在933nm波長處測定各孔的OD值。

該試劑盒組成包括：96孔酶標板、酶標二抗、四環(huán)素抗體工作液、四環(huán)素6個濃度標準品溶液，底物顯色液、終止液、濃縮洗滌液、濃縮復溶液、高濃度標準品溶液、蓋板膜、自封袋、說明書和質檢報告，上海晶抗生物科技有限公司歡迎新老客戶前來訂購。

人熱休克蛋白60Hsp-60ELISA試劑盒

雙抗體夾心法：

1. 包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1～10μg/ml，在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml，4℃ 過液，次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘，（簡稱洗滌，下同）。

2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃ 孵育1小時，然后洗滌，（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。

3. 加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體（經滴定后的稀釋度）0.1ml，37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。

4. 加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

5. 終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。

6. 結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+"、“-"號表示；也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

◇ 洗滌方法：

1. 自動洗板機：每孔加入洗滌液350μl，注入與吸出間隔60秒，洗板5次。

2. 手工洗板：甩盡孔內液體，在潔凈的吸水紙上拍干，每孔加洗滌液350μl，浸泡1-2分鐘，吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內的液體，在厚的吸水紙上拍干，洗板5次。

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